| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
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細胞炎癥因子檢測試劑盒說明書
一、檢測原理
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測樣本中的細胞炎癥因子水平。
向預先包被有細胞炎癥因子捕獲抗體的微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)恒溫溫育、充分洗滌后，加入TMB底物進行顯色反應。TMB可在過氧化物酶的催化下轉變?yōu)樗{色，最終在酸性終止液作用下轉為黃色。
樣本顏色深淺與其中細胞炎癥因子的含量呈正相關，使用酶標儀在450nm波長下測定各孔吸光度(OD值)，結合標準曲線即可精準計算樣品中炎癥因子的濃度。
二、試劑盒組成
試劑盒各組分規(guī)格、配置及保存條件如下表所示，所有試劑常規(guī)保存溫度為2-8℃。
| 組分名稱 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存條件 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 常溫 |
| 封板膜 | 2片 | 2片 | 常溫 |
| 密封袋 | 1個 | 1個 | 常溫 |
| 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃ |
| 標準品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃ |
| 酶標試劑 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃ |
三、樣本處理要求
為保障檢測結果精準可靠，避免樣本降解、污染導致結果失真，樣本采集與處理需嚴格遵循以下要求：
及時處理：患者樣本采集后需立即進行預處理，杜絕延遲處理引發(fā)的樣本變質、結果偏差問題。
樣本類型：可檢測樣本包括人體血液、血清、血漿、組織液等各類生物體液及組織樣本。
低溫保存：未及時檢測的樣本需置于低溫環(huán)境儲存，防止長時間放置導致樣本中炎癥因子降解失效。
避免反復凍融：嚴格杜絕樣本多次凍融循環(huán)，反復凍融會破壞樣本有效成分，影響檢測準確性。
規(guī)范預處理：所有樣本需嚴格按照試劑盒說明書要求完成前期處理、稀釋等操作，保證樣本純度達標。
操作防護：操作人員全程佩戴手套、口罩等防護用品，嚴格遵守實驗室操作規(guī)范，避免樣本交叉污染及人身暴露風險。
四、詳細操作步驟
本操作流程為通用標準步驟，不同批次試劑盒略有差異，實際操作請以配套說明書為準。
樣品加樣：將預處理完成的待測樣品(血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清等)、標準品依次加入酶標包被板微孔中。
試劑添加：按說明書配比與順序，向各微孔加入配套酶標檢測抗體等試劑，保證加樣均勻、無氣泡。
恒溫孵育：將加樣完成的孔板置于37℃恒溫環(huán)境中靜置孵育，使試劑與樣本中炎癥因子發(fā)生特異性免疫結合反應。
洗板除雜：孵育結束后，用稀釋后的洗滌液充分洗滌微孔，洗去未結合的雜質、多余試劑，消除檢測誤差。
顯色反應：依次加入顯色劑A液、B液，避光靜置反應，使樣本充分顯色。
終止反應：顯色完成后，加入終止液終止反應，溶液由藍色穩(wěn)定轉為黃色。
信號檢測：使用酶標儀在450nm波長條件下，測定各孔吸光度(OD值)并記錄數(shù)據(jù)。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)標準品OD值繪制標準曲線，代入樣本OD值，計算出待測樣本中細胞炎癥因子的實際濃度及稀釋校正后最終含量。
五、實驗注意事項
試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出后，需室溫平衡15-30分鐘方可使用；酶標包被板未用完的板條，需裝入密封袋密封保存。待測樣本使用前需室溫平衡60分鐘。
20×濃縮洗滌液低溫環(huán)境可能出現(xiàn)結晶析出，屬于正常現(xiàn)象，可溫水浴加溫助溶，溶解后使用不影響實驗結果。
全程加樣需使用校準合格的加樣器，定期校對精度，規(guī)避加樣誤差；單次整板加樣時間控制在5分鐘內，樣本數(shù)量較多時建議使用排槍加樣。
每次檢測必須同步做標準曲線，優(yōu)先設置復孔檢測，提升數(shù)據(jù)準確性。若樣本OD值高于標準品最高孔OD值，需用樣品稀釋液稀釋樣本后重新檢測，最終結果需乘以對應總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
封板膜為一次性耗材，僅限單次實驗使用，嚴禁重復使用，防止交叉污染。
顯色底物需避光密封保存，避免光照失效，影響顯色效果。
嚴格遵循說明書操作，所有實驗結果判定均以酶標儀儀器讀數(shù)為標準，禁止肉眼主觀判讀。
實驗所用樣本、洗滌液、廢棄耗材均按傳染性實驗廢棄物規(guī)范處理，做好生物安全防護。
試劑盒不同批號組分性能存在差異，嚴禁跨批號混用試劑，避免實驗失效。
中英文說明書內容存在歧義時，以英文說明書標準為準。
